Autor(a): Raphael Grillo da Silva
Orientador(a): Prof. Dr. Eduardo Fernandes Bondan
Data da defesa: 06/06/2024
Resumo: O sarcoma de aplicação em felino (SAF) é uma neoplasia maligna de origem mesenquimal, induzida por um processo inflamatório crônico e exacerbado, secundário a aplicações subcutâneas ou intramusculares. A ressecção cirúrgica é o tratamento mais adequado, no entanto, devido à alta recidiva local, são indicadas terapias multimodais para antagonizar o processo e melhorar os resultados clínicos. Entre elas, vem se destacando a eletroquimioterapia (EQT). O objetivo deste trabalho foi o de avaliar a eficácia da EQT com bleomicina como terapia adjuvante à ressecção cirúrgica em animais com SAF, por meio de um estudo retrospectivo, utilizando como critérios o tempo livre da doença e as taxas de recidivas do tumor nos animais, após a realização dos procedimentos. Foram analisados 40 prontuários de animais com SAF de 2017 até 2023, distribuídos de forma homogênea nos grupos cirurgia (GC, n = 20), de gatos submetidos somente à ressecção cirúrgica, e eletroquimioterapia (GE, n = 20), de gatos, submetidos à cirurgia associada com EQT com bleomicina. Os animais foram acompanhados até o relato de recidivas ou por um período mínimo de 280 dias. Fêmeas, sem raça definida e com idade média de 10,45 anos, foram as mais acometidas e um baixo potencial metastático foi observado (12,5% dos animais), sendo o pulmão o órgão mais acometido. O tipo histológico predominantemente encontrado foi o fibrossarcoma, sendo a maioria dos tumores classificados entre graus intermediários e altos de malignidade. Recidivas tumorais foram observadas em ambos os grupos e o tempo mediano livre da doença nestes animais não sofreu influência do tratamento. No entanto, o uso da EQT com bleomicina como tratamento adjuvante apresentou resultados positivos no controle tumoral, visto que, no GC, 85% dos animais apresentaram recidiva, já no GE esse relato foi de apenas 35%. Um teste de Chi Quadrado foi conduzido, indicando que um animal tratado com EQT teve uma chance 10,52 vezes maior de não apresentar recidiva em comparação a um animal tratado apenas com cirurgia. Além disso, a EQT mostrou mínimos efeitos colaterais, indicando que pode ser uma terapia eficaz na rotina veterinária.
Palavras-chave: Eletroporação; Fibrossarcoma; Gato; Tumor; Vacina.
Área de Concentração: Patologia Ambiental e Experimental.
Linha de Pesquisa: Patologia Integrada e Translacional.
Autor(a): Talita Rolim de Freitas Lima
Orientador(a): Prof. Dr. Welber Senteio Smith
Data da defesa: 10/06/2024
Resumo: No meio aquático, a exposição a parasitos difere de outros ambientes visto que, os ovos e larvas de parasitos se disseminam na água com muito mais facilidade. Assim, os peixes ficam constantemente expostos a organismos parasitas, e como qualquer outro vertebrado aquático podem ser parasitados por vírus, bactérias, fungos, helmintos, crustáceos entre outros. Os ambientes de riachos representam ecossistemas aquáticos singulares, caracterizados por uma interconexão complexa entre diversos componentes bióticos e abióticos. Os parasitos são importantes na função de controle da ictiofauna, bem como, também são excelentes indicadores de qualidade do ambiente. Considerando a complexidade e a importância da ictioparasitologia em ambientes de riachos, o objetivo deste estudo é apontar as lacunas dos estudos referentes à ictioparasitologia de riachos. Por meio de uma revisão sistemática da literatura, selecionamos 32 artigos, das principais bases de dados, publicados nos últimos 33 anos, onde foram apresentadas diferentes técnicas metodológicas para caracterização e identificação de parasitos em peixes de riachos. Os artigos relataram ainda uma diversidade de peixes que são suscetíveis ao parasitismo, e aqueles com maior valor econômico. A escassez de trabalhos publicados revela, não apenas uma lacuna existente na literatura, mas também aponta uma subvalorização do papel dos ambientes de riachos na ecologia parasitológica. Adicionalmente, este trabalho objetivou ainda uma análise sobre o impacto da doença dos pontos pretos no fator de condição de duas espécies de peixes de pequeno porte, em um riacho neotropical, as espécies Phalloceros harpagos e Psalidodon paranae. Os espécimes foram coletados em um riacho neotropical no interior do estado de São Paulo, Brasil. Os indivíduos coletados foram analisados e triados, conforme a presença ou não de parasitos. Após as análises dos dados estatísticos, concluímos que, apesar da alta taxa de incidência de pontos pretos nos peixes, apenas nas fêmeas de P. harpagos apresentaram influência no fator de condição quando comparando ao fator de condição dos indivíduos que não estavam parasitados. Indivíduos de P. paranae não foram significativamente afetados pela presença dos parasitas causadores da doença dos pontos pretos.
Palavras-chave: Ictioparasitologia; relações interespecíficas; revisão sistemática; Phalloceros harpagos; Psalidodon paranae.
Área de Concentração: Patologia Ambiental e Experimental.
Linha de Pesquisa: Ecotoxicologia e Inovações Terapêuticas.
Grupo de Pesquisa da UNIP cadastrado no CNPq: Ecologia Estrutural e Funcional de Ecossistemas.
Autor(a): Thiago Mündel Ribeiro Santos
Orientador(a): Prof. Dr. Welber Senteio Smith
Data da defesa: 12/06/2024
Resumo: Riachos possuem uma grande importância para a biodiversidade dos peixes de água doce no mundo, sendo o Brasil, o maior detentor desta diversidade. Esses ecossistemas possuem uma dinâmica complexa em relação ao seu entorno, o que aumenta a taxa de endemismo de peixes de pequeno porte. Por vezes, esses corpos hídricos acabam sendo impactados por barragens e outras intervenções a fim de controlar o fluxo hídrico, o que pode acarretar em dificuldades para a sobrevivência de algumas espécies de peixes. Com o intuito de solucionar esse problema, atividades de restauração podem ser realizadas em áreas perturbadas para proporcionar a recuperação do leito do riacho, da vegetação ripária e consequentemente, gerar um aumento de habitats resultando em condições mais próximas das originais, o que beneficiaria as comunidades de peixes. Com o acompanhamento de observações a longo prazo e coletas sistemáticas é possível avaliar se essas modificações proporcionam uma recolonização por parte da ictiofauna nativa. Para melhor compreensão das dinâmicas dos riachos impactados e restaurados, um ambiente de referência deve ser utilizado. O objetivo deste trabalho é comparar a riqueza, abundância e diversidade de peixes em dois riachos encontrados na bacia do Riacho da Campininha, um afetado por diversas alterações e posteriormente restaurado, e outro menos alterado, de forma a entender as substituições de espécies ao longo dos anos, e encontrar a melhor maneira de conectar as comunidades icticas. Através da comparação do índice de diversidade de Shannon de ambos os riachos, foi constatado que não houve diferença significativa (p = 0,07). Porém, quando comparado a parte acima e abaixo do gabião no Riacho da Campininha, houve diferença significativa, tanto para número de espécies, dominância e índice de diversidade de Shannon (p = <0,001). Isso se dá pelo fato de que o trecho acima do gabião encontra-se isolado, com a dominância de mais de 99% da espécie invasora Poecilia reticulata, sendo que abaixo desse ponto, diversas outras espécies são encontradas. Apesar do riacho referência também apresentar uma barreira (queda d’água), esta não impacta a comunidade de peixes, já que não foi detectada diferença significativa entre a diversidade acima e abaixo da queda d’água (p = 0,667). Por fim, entende-se que, apesar de ambos os riachos apresentarem similaridade quanto aos índices de diversidade, fatores como a dominância de indivíduos invasores e ausência de conectividade longitudinal interferem no Riacho da Campininha, problemas esses que podem ser resolvidos com projetos focados na reconexão dos trechos de montante e jusante.
Palavras-chave: Restauração ecológica; Espécies invasoras; Assoreamento; Conexão longitudinal.
Área de Concentração: Patologia Ambiental e Experimental
Linha de Pesquisa: Ecotoxicologia e Inovações Terapêuticas.
Grupo de Pesquisa da UNIP cadastrado no CNPq: Ecologia Estrutural e Funcional de Ecossistemas
Autor(a): Victor Hugo da Silva Koengnikam
Orientador(a): Profa. Dra. Alessandra Marnie Martins Gomes de Castro
Data da defesa: 14/06/2024
Resumo: Nos últimos anos, o número de doenças infecciosas virais em suínos tem aumentado significativamente por diversos fatores. Entre elas, o Porcine circovirus (PCV) apresenta grande impacto no setor de produção, com o PCV3 ganhando destaque na pesquisa atualmente. Além de afetar os suínos de produção, pesquisas apontam a detecção em diversas outras espécies de produção e silvestres, entre elas o Tayassu pecari (queixada) que se encontra amplamente distribuído por diversos biomas do território nacional. O objetivo deste trabalho foi investigar a presença de PCV3 em amostras de soro e tecidos de queixadas de vida livre no Brasil. Foram analisadas 73 amostras, das quais 64 eram de soro e nove de tecido, provenientes de 66 animais diferentes, tendo como origem três parques estaduais do estado de São Paulo. Foi utilizada a técnica de reação em cadeia pela polimerase quantitativa (qPCR) com o sistema TaqMan® para amplificação de PCV3. Após a aplicação de critérios de exclusão, 64 amostras foram analisadas, oriundas de 57 animais. Dos 57 animais, 7% (4/57) foram positivas para PCV3, sendo três amostras de soro e uma de tecido. Este estudo revelou prevalência de 7% (4/57) de PCV3 nas amostras de Tayassu pecari estudadas, constituindo assim o primeiro relato na literatura sobre a presença do vírus nesta espécie. Este achado coloca o Tayassu pecari na ampla lista de espécies nas quais a presença do PCV3 já foi detectada.
Palavras-chave: Queixada; vírus suíno; qPCR.
Área de Concentração: Patologia Ambiental e Experimental.
Linha de Pesquisa: Patologia Integrada e Translacional.
Autor(a): Jéssika Takaki
Orientador(a): Prof. Dr. José Guilherme Xavier
Data da defesa: 21/06/2024
Resumo: Lesões actínicas neoplásicas decorrem do excesso cumulativo de exposição à radiação ultravioleta podendo originar tumores epiteliais malignos. Há estudos que relacionam tal comportamento com a ativação de COX-2 pela radiação ultravioleta em carcinomas de células escamosas (CCE), induzindo a transição epitelial mesenquimal (TEM). Um dos marcadores da TEM é a vimentina, filamento intermediário inato em células mesenquimais, envolvido no processo de invasão em carcinomas. A progressão tumoral compreende não apenas alterações genéticas e epigenéticas nas células neoplásicas, mas também a modulação estromal, e a produção da matriz extracelular no microambiente tumoral, com destaque para a deposição de colágeno. Neste estudo foram avaliadas lesões actínicas de ocorrência natural em pina de gatos, relacionando-as à classificação e graduação histopatológica dos processos, imunoexpressão de COX-2 e vimentina nas células neoplásicas, além da investigação da modulação miofibroblástica e do padrão de deposição colagênica na lesão. Foram avaliadas 20 amostras de pima de gatos, sendo 2 ceratoses actínicas e 18 CCEs de diferentes graus de malignidade. Embora sem diferença estatisticamente significante, evidenciou-se uma tendência ao aumento na expressão de COX-2 nas células neoplásicas, e a ativação miofibroblástica e deposição colagênica em estroma, acompanhando a agressividade lesional. Não foi identificada expressão de vimentina nas células malignas. Tais achados evidenciam modificações no microambiente lesional, relacionadas em particular aos focos de invasão neoplásica, fornecendo subsídios para uma maior compreensão dessas condições e possíveis intervenções terapêuticas com a finalidade de melhorar a qualidade de vida dos animais.
Palavras-chave: Carcinoma de células escamosas, COX-2, felino, microambiente tumoral; miofibroblasto.
Área de Concentração: Patologia Ambiental e Experimental.
Linha de Pesquisa: Ecotoxicologia e Inovações Terapêuticas.
Grupo de Pesquisa da UNIP cadastrado no CNPq: Biologia da diferenciação e transformação celulares: modulação por fatores endógenos e exógenos.
Autor(a): Larissa Leandra Moro da Silva
Orientador(a): Prof. Dr. Welber Senteio Smith
Data da defesa: 25/06/2024
Resumo: É importante compreender os aspectos biológicos reprodutivos das espécies para entender como uma comunidade de peixes se comporta e responde aos fatores bióticos e abióticos aos quais estão suscetíveis. Além dos fatores comuns ao ambiente, como temperatura e fotoperíodo, as ações antrópicas, como poluição, introdução de espécies invasoras e os barramentos podem afetar o ciclo reprodutivo dos peixes, influenciado a sua dinâmica reprodutiva. As espécies migradoras, que podem percorrer longas distâncias entre os sítios de alimentação até as áreas adequadas para desova, são as que mais sofrem com esses impactos ambientais, principalmente os barramentos. Sendo assim, estudar e compreender a reprodução das espécies de peixes migradores em uma bacia hidrográfica, permite além do conhecimento, subsidiar ações efetivas para permanência de trechos livres de barramentos, importantes para a manutenção dessas espécies. Com a presença do barramento e a poluição dos rios muitas espécies encontram em seus tributários uma rota alternativa para completarem seu ciclo de vida, como é o caso do Rio Tietê, possuindo o rio Sorocaba, principal afluente da sua margem esquerda, um importante tributário para a manutenção das espécies migradoras. Além disso, o rio Sorocaba possui cinco afluentes que dispõem de trechos livres de barramentos, importantes para manter uma das principais espécies migradoras da bacia, Prochilodus lineatus e Salminus hilarii. O presente estudo busca compreender não apenas os aspectos intrínsecos à reprodução dessa espécie, mas também como a presença de barragens impacta no seu ciclo de maturação gonadal.
Palavras-chave: Espécies migradoras, barragens, maturação, reprodução, hidrologia.
Área de Concentração: Patologia Ambiental e Experimental.
Linha de Pesquisa: Ecotoxicologia e Inovações Terapêuticas.
Grupo de Pesquisa da UNIP cadastrado no CNPq: Ecologia Estrutural e Funcional de Ecossistemas.
Autor(a): Priscilla Helena Parisotti Castanha
Orientador(a): Profa. Dra. Maria Martha Bernardi
Data da defesa: 28/06/2024
Resumo: O sobrepeso e a obesidade são distúrbios nutricionais definidos como o acúmulo anormal ou excessivo de gordura corporal que apresentam risco à saúde. Dados epidemiológicos demonstram aumento exponencial da prevalência do sobrepeso e da obesidade em crianças, adolescentes e adultos de todo o mundo e, no público infanto-juvenil, este aumento é ainda mais alarmante. Neste trabalho, focou-se na supernutrição neonatal e nos efeitos da administração de lipopolissacarídeo (LPS) sobre o comportamento tipo-depressivo, a adiposidade e os sinais de inflamação periférica e central em ratos machos Wistar. Para isso, as ninhadas do grupo experimental, denominado grupo supernutrição, foram reduzidas a 4 animais e as ninhadas do grupo controle, denominadas normonutrição, foram padronizadas com 8 animais. O peso corporal foi avaliado durante a lactação. Nos dias pós nascimento (DPNs) 31-32, os filhotes foram subdivididos em dois novos grupos em que ratos de ninhadas com 4 filhotes e com 8 filhotes receberam 100 µg/kg, intraperitoneal (IP) de LPS e 0,1 ml de solução salina tamponada com fosfato (PBS), respectivamente, perfazendo os seguintes grupos: grupo controle + PBS (GS), grupo controle + LPS (GLPS), grupo supernutrição + PBS (GHS) e grupo supernutrição + LPS (GHLPS). Os animais foram então pesados e tratados de acordo com seu grupo; quatro horas após estes tratamentos avaliou-se a temperatura cutânea e o comportamento de natação forçada. Imediatamente após estes experimentos, os ratos foram submetidos a eutanásia, o encéfalo retirado e uma porção do tecido visceral abdominal isolado para avaliação do número e área dos adipócitos. Os resultados mostraram que os ratos de ninhadas reduzidas apresentaram maior ganho de peso nos DPNs 21 e 31; o grupo GHLPS apresentou aumento da temperatura cutânea com relação ao grupo GHS; o grupo GHLPS apresentou menor latência para primeira imobilidade e maior tempo de imobilidade no teste de natação forçada em relação aos demais grupos; o grupo GLPS apresentou menor frequência de adipócito maiores em relação ao grupo GS; o peso do fígado foi maior nos animais do grupo GHLPS em relação aos demais grupos; não foram observadas alterações histopatológicas importantes na análise histológica do fígado; e a expressão astrocitária do GFAP foi maior nos grupos GLPS, GHS e GHLPS em relação ao grupo GS. Esses dados indicam que a redução da ninhada promoveu aumento do ganho de peso dos animais durante a lactação e idade pré-púbere. A administração de LPS intensificou a resposta inflamatória, influenciando a temperatura corporal, o tecido adiposo e o comportamento dos animais. Observou-se um aumento na expressão de GFAP em astrócitos hipotalâmicos, indicando uma inflamação precoce associada à obesidade.
Palavras-chave: comportamento; depressão; inflamação; obesidade infantil; sobrepeso.
Área de Concentração: Patologia Ambiental e Experimental.
Linha de Pesquisa: Patologia Ambiental e Experimental.
Autor(a): Raquel Saab Romano
Orientador(a): Prof. Dr. José Guilherme Xavier
Data da defesa: 30/06/2024
Resumo: A obesidade é caracterizada pelo depósito excessivo de gordura no corpo no qual gera transtornos à saúde do indivíduo. É a afecção nutricional e metabólica mais frequente em cães e gatos e de incidência crescente nos últimos anos. Os principais fatores ambientais envolvidos com o desenvolvimento desta doença em felinos são: confinamento, sedentarismo e manejo alimentar hipercalórico. Estudos em obesidade tem ganhado grande ênfase nas pesquisas científicas em humanos e animais, e já se sabe que o tecido adiposo (TA) pode secretar adipocinas que participam em processos de regulação do balanço energético e modulam a sensibilidade à insulina, caracterizando quadros de resistência insulínica. Em pacientes humanos, a obesidade vem sendo associada com aumento de volume e padrão heterogêneo da glândula tireoide ao exame ultrassonográfico. O impacto da obesidade sobre a tireoide ainda não foi avaliado em medicina veterinária, sendo este o principal objetivo do presente estudo. Foram selecionados 21 felinos provenientes da rotina clínica de atendimento veterinário autônomo e dois grupos foram formados conforme o índice de massa corporal (IMC) de cada um, sendo: C = controle (IMC entre 15 e 30%) e O = obeso (IMC acima de 30%). Em todos os animais do estudo foram realizados avaliação física, exames laboratoriais e ultrassonografia da tireoide. Os resultados foram analisados em software estatístico com nível de significância α<0,05. O grupo obeso apresentou diferença estatística significante em relação ao grupo controle quanto aos valores elevados de glicose (p= 0,0332), insulina (p= 0,0195), triglicerídeos (p= 0,017) e haptoglobina (p= 0,0329), além de volume da tireoide aumentado (p= 0,0001). Podemos concluir que o grupo obeso apresentou aumento do volume tireoidiano ao exame ultrassonográfico, porém, distintamente do observado em humanos, em padrão homogêneo e sem nodulações, além da elevação de índices metabólicos relacionados à resistência insulínica, dislipidemia e inflamação.
Palavras-chave: Felinos, haptoglobina, obesidade, tireoide, ultrassom.
Área de Concentração: Patologia Ambiental e Experimental.
Linha de Pesquisa: Patologia Integrada e Translacional.
Grupo de Pesquisa da UNIP cadastrado no CNPq: Biologia da diferenciação e transformação celulares: modulação por fatores endógenos e exógenos.
Autor(a): Caren Ingrid Silva Macedo
Orientador(a): Profa. Dra. Anuska Marcelino Alvares Saraiva
Data da defesa: 16/12/2024
Resumo: Fatores genéticos e epigenéticos podem predispor a população ao diabetes, doença com potencial para várias complicações como a nefropatia diabética (ND). Um ponto em comum entre o diabetes e a ND são as possíveis complicações na biologia óssea. Estudos recentes têm abordado a função endócrina do osso e, mais especificamente, as condições que a hiperglicemia podem causar desequilíbrio na expressão de hormônios sintetizados pelo osso. Neste sentido, destacamos a osteocalcina (OCN), uma proteína codificada pelo gene Bglap, e seu receptor expresso no rim Gprc6a (receptor acoplado à proteína G da família C grupo 6 membro A). O papel da epigenética na quebra de homeostase entre o eixo osso-rim, decorrente da hiperglicemia, permanece ainda desconhecido. Objetivo: Investigar o controle transcricional epigenético da OCN e do receptor Gprc6a no rim de ratos submetidos à hiperglicemia crônica, além de avaliar o metabolismo energético renal. Metodologia: Ratos Wistar foram submetidos à hiperglicemia crônica, por meio da administração intraperitoneal de estreptozotocina (STZ). Foram avaliadas as variações da glicemia e peso ao longo de 60 dias e, ao final do estudo, foram coletados os órgãos para avaliação morfológica do pâncreas e rim e do metabolismo renal. Amostras de rins, fêmures e mandíbulas foram preparadas para avaliação da expressão gênica da OCN e Gprc6a no tecido renal e ósseo; expressão das Dnmt’s e Tet’s no rim; e as porcentagens das marcas responsávéis pela metilação específica, relacionado aos genes responsáveis pela expressão da OCN e do receptor Gprc6a no rim. Resultados: o grupo STZ apresentou diminuição de peso e permaneceu em estado hiperglicêmico durante todo o período experimental. Na avaliação histológica, o pâncreas apresentou diminuição na área e perímetro das ilhotas pancreáticas, no rim foram observadas alterações semelhantes às encontradas na ND, com presença de espessamento na membrana basal glomerular e tubular, comparados ao controle. A atividade máxima das enzimas associadas ao metabolismo não foi diferente estatisticamente entre os grupos observados, porém há uma tendência no aumento da atividade de Cpt1 e diminuição de hexoquinase e fosfofrutoquinase, mas não de G6PDH. No grupo controle, na comparação entre o rim, mandíbula e fêmur os resultados mostram maior expressão de Bglap no tecido ósseo e maior expressão do gene codificador de Gprc6a no rim. No grupo STZ foi observado nos rins diminuição na expressão de Bglap, aumento na expressão de Gprc6a, aumento na expressão das Dnmt1 e Dnmt3a, diminuição na expressão da Dnmt3b e aumento na expressão das Tet1, Tet2 e Tet3. Na razão entre 5-meC/5-hmeC foi identificado porcentagem significante de 5-meC na região codificante de Gprc6a. Conclusão: a hiperglicemia crônica alterou a comunicação entre o eixo osso-rim por meio da modificação na expressão da OCN e Gprc6a e alterações nas vias de ácidos graxos e glicólise. No entanto, apesar da modulação epigenética, não foi possível correlacionar a metilação específica com o estado transcricional. Os resultados demonstrados aqui poderão auxiliar na compreensão de estudos futuros e subsidiar a exploração das funções do eixo osso-rim.
Palavras-chave: SARS-CoV-2; Diabetes Mellitus, Rim, Osteocalcina.
Área de Concentração: Patologia Ambiental e Experimental.
Linha de Pesquisa: Patologia Integrada e Translacional
Grupo de Pesquisa da UNIP cadastrado no CNPq: CLININFEC - Clínica e doenças infecciosas veterinárias.
Autor(a): Mário Domingues de Castro
Orientador(a): Profa. Dra. Leoni Villano Bonamin
Data da defesa: 18/12/2024
Resumo: A osteoartrite é um processo inflamatório degenerativo e uma condição clínica comum em equídeos, sendo a principal causa de perda de desempenho e aposentadoria precoce. Este estudo foi aprovado pelo comitê de ética da UNIP (CEUA nº 1847210823) e propõe um manejo terapêutico inovador para controle desta afecção quando em grau leve ou moderado, utilizando a associação entre um complexo homeopático comercial Drenareuma WP® (Curitiba, Brasil) composto por Bryonia alba 4cH, Mezereum 6cH, Ranunculus bulbosus 5cH, Rhus Toxicodendron 5cH, Ruta graveolens 5cH e excipientes, administrado em comprimidos (um comprimido por dia durante 90 dias) e um tratamento tópico diário de uma pomada à base de óleo essencial de Cordia verbenacea e excipientes - Curadermy® (São Paulo, Brasil). Dez equídeos foram selecionados, em sequência, na policlínica veterinária da UNIP, São José dos Campos, Brasil, de acordo com critérios de inclusão e exclusão e o tutor expressou concordância por escrito. Nos dias zero e 90 (D0 e D90), os animais foram cuidadosamente examinados e submetidos a técnicas de diagnóstico por imagem da articulação metacarpo-falangeana ou metatarso-falangeana mais afetada em projeções radiográficas ortogonais, bem como imagens ultrassonográficas das faces dorso-palmar e latero-medial, em cortes longitudinais e transversais. A observação final foi pontuada de acordo com os critérios de Naranjo modificados para homeopatia. A espessura das estruturas analisadas foi mensurada pelo ultrassom e avaliadas estatisticamente pelo teste “t” de Student, comparando-se D0 a D90, com p≤0.05. Em D0 observou-se aumento do volume dos tecidos moles com redução do espaço articular, lise óssea, esclerose óssea subcondral e osteófitos periarticulares. Em D90 todos os animais apresentaram melhora clínica, sem claudicação, com redução estatisticamente significante da espessura da cápsula articular e atenuação visual de esclerose óssea subcondral, lise óssea e osteófitos, indicando regeneração articular parcial. Não houve efeitos colaterais observáveis. Os escores de Naranjo variaram de 10 a 11, sendo o máximo de 13 pontos. Conclui-se que os resultados indicam a efetividade do protocolo proposto, o que justificaria um ensaio randomizado placebo-controlado futuro para a validação da eficácia clínica.
Palavras-chave: Homeopatia; Cordia verbenacea; associação medicamentosa; artrose.
Área de Concentração: Patologia Ambiental e Experimental.
Linha de Pesquisa: Ecotoxicologia e Inovações Terapêuticas
Grupo de Pesquisa da UNIP cadastrado no CNPq: Terapêutica medicamentosa aplicada às Ciências da Saúde.
Autor(a): Ana Luiza Gonçalves Valgas
Orientador(a): Profa. Dra. Anuska Marcelino Alvares Saraiva
Data da defesa: 20/12/2024
Resumo: A Diabetes mellitus (DM) é uma doença metabólica crônica responsável por milhões de mortes anualmente e, apesar de existir tratamento, permanece ainda sem cura, incentivando diversos estudos, especialmente no âmbito das terapias celulares. A partir da descoberta de que linfócitos B-1 são capazes de produzir insulina e regular a glicemia de camundongos diabéticos, nosso grupo de pesquisa busca meios de viabilizar uma terapia celular a partir dessas células. Dentre os desafios encontrados está a necessidade de co-cultivar os linfócitos B-1 com macrófagos para sua sobrevivência. Inicialmente, estudos mostraram que a IL-6 era responsável por essa dependência, porém temos observado maior sobrevivência de linfócitos B-1 submetidos ao protocolo de reprogramação metabólica (RM) para diferenciação em células produtoras de insulina, mas ainda dependente da presença de macrófagos. Deste modo, no presente trabalho buscamos compreender a influência do protocolo para RM na produção de citocinas e no metabolismo de glicose por macrófagos em culturas de células peritoneais aderentes. Para tanto, foi cultivada a porção aderente de células do lavado peritoneal e, as culturas, submetidas à RM, a partir do cultivo das células em meio suplementado com crotoxina, altas concentrações de glicose e nicotinamida. Após, foram avaliados os macrófagos em relação à captação e metabolismo da glicose, expressão de genes relacionados ao metabolismo da glicose e produção de citocinas, além da quantificação de citocinas no sobrenadante das culturas. Os achados revelaram que nos momentos iniciais da cultura, quando as células foram tratadas com glicose e crotoxina, foi observado ao longo de 72 horas, aumento das citocinas IL-12 e IFN-γ mas também IL-10. Em comparação com o controle, os níveis de TNF-α, MCP-1 e IL-6 estavam mais baixos. Aos 6 dias, sem crotoxina, com nicotinamida e 30mM de glicose, também foi observado menores níveis de IL-6 e TNF-α. Já a expressão genética relativa demonstrou cerca de 3x mais expressão de IL-6 no grupo do protocolo que no controle. Não houve diferença na expressão dos genes sinalizadores da via de produção de citocinas, o MyD88 e o NF𝜿B. A tendência ao aumento da expressão gênica de IL-6 associado aos níveis diminuídos dessa citocina nas culturas, nos fez investigar em linfócitos B-1 a expressão dos genes associados ao consumo dessa citocina. No grupo submetido ao protocolo houve tendência à maior expressão do receptor de IL-6 e STAT3. Ainda, houve aumento da viabilidade e diminuição da apoptose em macrófagos presentes no co-cultivo quando submetidos à RM. Embora a captação de glicose pareceu estar diminuída, assim como a expressão de Glut-1, a atividade máxima das enzimas associadas à glicólise aumentou após o protocolo, enquanto foi observada uma tendência à diminuição da atividade enzimática associada à via das pentoses. Também, todos os genes avaliados associados à via glicolítica ou lipolítica estavam modulados negativamente nos macrófagos reprogramados. Em conclusão, o protocolo de RM direcionado à produção de insulina por linfócitos B-1 afeta também o metabolismo e o perfil inflamatório dos macrófagos, também presentes na cultura, revelando características de macrófagos M2, mais anti-inflamatório. No entanto, a expressão gênica contrapõe esses achados. A expressão diminuída de Glut-1 corrobora com a menor captação de glicose observada, embora a atividade máxima enzimática sugere aumento da via glicolítica clássica. Os resultados, em qualquer momento avaliado, indicam maior produção de IL-6 por macrófagos reprogramados metabolicamente e provável consumo dessa citocina por linfócitos B-1. Em conjunto, esses resultados auxiliam na compreensão da sinergia entre macrófagos e linfócitos B-1 e reforçam a importância da IL-6 para a sobrevivência do linfócito, fato que auxiliará os estudos que visam o estabelecimento da terapia celular para o controle da DM a partir de linfócitos B-1.
Palavras-chave: Metabolismo; Linfócitos B-1; Macrófagos; Citocinas; Sinergia.
Área de Concentração: Patologia Ambiental e Experimental.
Linha de Pesquisa: Patologia Integrada e Translacional.
Autor(a): Cleiton França Batista
Orientador(a): Prof. Dr. Rodrigo Augusto Foganholi da Silva
Data da defesa: 20/12/2024
Resumo: A abordagem One Health é um método eficaz para o gerenciamento de doenças zoonóticas em humanos, animais e ambientes. No caso de zoonoses cutâneas, a pele desempenha um papel central e pode atuar como uma barreira de proteção contra patógenos ou se tornar um importante meio de transmissão. Neste contexto, este estudo teve como objetivo estabelecer um modelo experimental baseado no cultivo de células cutâneas para investigar infecções fúngicas zoonóticas. Métodos: Para isso, linhagens de queratinócitos humanos (HaCaT) e fibroblastos gengivais (FGH) foram cultivadas separadamente e cocultivadas em monocamada e sobre substrato colagênico e então expostas aos patógenos Criptococcus gattii (C. gattii) e Encephalitozoon cuniculi (E. cuniculi) (MOI 2:1, 4:1 e 8:1) por 48 horas e 7 dias. Em seguida, a viabilidade celular foi determinada pela redução do MTT e os parâmetros histopatológicos e a concentração de citocinas foram analisados. Os resultados mostraram que, para os fibroblastos, ambas as infecções promoveram aumento da atividade metabólica tanto em 48 horas quanto em 7 dias em todas as concentrações. Diferentemente, no HaCaT exposto ao C. gattii ocorreu diminuição da atividade metabólica apenas na concentração 2:1 em 48 horas e diminuição após 7 dias em todas as concentrações. Para cocultura, a infecção aumentou a atividade metabólica em 48 horas e reduziu em 7 dias. Adicionalmente, a citometria de fluxo com Anexina e 7-AAD foi utilizada para avaliar o tipo de morte celular. Nos FGH expostos a E. cuniculi, observou-se uma inibição da necrose primária e um aumento da apoptose programada, possivelmente favorecendo a sobrevivência do microrganismo por meio de um mecanismo sofisticado de evasão imune, permitindo sua replicação sem desencadear uma resposta inflamatória intensa. No co-cultivo, entretanto, E. cuniculi apresentou um comportamento distinto: a porcentagem de células viáveis não diferiu significativamente do controle, mas houve um aumento na apoptose tardia e na necrose. Diferente do que foi observado em FGH isolados, o microrganismo apresentou menor taxa de apoptose, sugerindo que, em um ambiente mais fisiológico, sua interação com as células ocorre de maneira diferenciada. Já na infecção por C. gattii, verificou-se um aumento na viabilidade celular tanto nos FGH isolados quanto no co-cultivo, com baixa taxa de apoptose, apoptose tardia e necrose no co-cultivo. Esse achado sugere que o microrganismo emprega mecanismos para prolongar a viabilidade celular, favorecendo sua multiplicação e sobrevivência. A coloração com HE e Giemsa confirmou a presença de microrganismos no espaço intracelular apenas para o E. cuniculi, evidenciando sua característica de parasita intracelular obrigatório. Na avaliação das citocinas, a infecção por C. gattii em células cultivadas em monocamada induziu uma resposta pró-inflamatória, acompanhada por uma resposta reguladora simultânea e imunossupressão, caracterizada pela redução das concentrações de IL-8, IL-6 e IL-10 na infecção por E. cuniculi. Por outro lado, no co-cultivo em substrato colagênico, a infecção por C. gattii induziu uma resposta inflamatória, enquanto a presença de Condroitin Sulfato demonstrou um possível efeito anti-inflamatório. Nossos resultados validam a aplicação do cultivo de células cutâneas como uma ferramenta eficaz para investigar as características imunológicas e citotóxicas das infecções zoonóticas cutâneas. Contudo, a análise conjunta dos resultados fundamenta a utilização preferencial do substrato colagênico enriquecido pelo C.S. para o estudo de patógenos intracelulares obrigatórios.
Palavras-chave: C. Gattii; E. cuniculi;zoonoses; infecções fúngicas; cultura de células.
Área de Concentração: Patologia Ambiental e Experimental.
Linha de Pesquisa:Patologia Integrada e Translacional.
Autor(a): Cristiane Morais
Orientador(a): Profa. Dra. Elizabeth Cristina Perez Hurtado
Data da defesa: 20/12/2024
Resumo: Extrato de Viscum album L. é utilizado há séculos para fins medicinais e recentemente como tratamento complementar do câncer. Estudos recentes do grupo de Onco-Homeopatia da UNIP, utilizando ultradiluições de extratos hidroalcóolicos de Viscum album L. (Va), preparadas em diferentes escalas de diluição mostraram efeitos na viabilidade, atividade metabólica, produção de citocinas inflamatórias e diminuição das manifestações clínicas relacionadas à fadiga do câncer em modelos in vitro e in vivo de melanoma murino. Entretanto os efeitos desses medicamentos na capacidade de migração das células de melanoma murino não foram avaliados. Assim, o intuito do presente projeto foi avaliar in vitro, o potencial de migração das células de melanoma B16F10 antes e após tratamento com ultradiluições de Va nas potências 12X, 200C e 5LM. Para isto, células B16F10 foram tratadas ou não por 24 horas com os veículos (água ultrapura, filtrada e dinamizada na potência a ser avaliada) ou com a tintura mãe de extrato alcoólico de Va obtido da árvore hospedeira Quercus robur, no verão suíço (TM-VaQrV), ou com ultradiluições de TM-VaQrV, nas potências de 12X, 200C e 5LM para ensaios de migração (wound healing) e quantificação dos níveis de óxido nítrico (NO), liberados no sobrenadante de cultura após cada tratamento, nos tempos de 24 e 48 horas. Em paralelo, análises quantitativas das fibras de colágeno presentes nas biópsias de tumores de camundongos com melanoma tratados ou não com esses medicamentos foram avaliadas utilizando a coloração de picrosirius. Resultados obtidos não mostraram diferenças significativas na capacidade de migração celular, das células B16F10 após tratamento com tintura mãe ou ultradiluições de Va. Em contraste, o tratamento com as potências 12X e 5LM levaram à diminuição significativa dos níveis de NO observados nas células tratadas somente com o veículo. Paralelamente, análises do porcentual da área de fibras de colágeno presentes nos tumores de animais tratados com esses medicamentos também não revelaram diferenças significativas em relação aos tumores de animais não tratados. Em conjunto, estes dados inéditos serão apresentados em formato de artigo para submissão na revista Homeopathy, com o intuito de contribuir na compreensão dos mecanismos celulares e moleculares induzidos pelo tratamento com diferentes ultradiluições de Va, que levaram à melhora da qualidade de vida de animais com melanoma, observada em estudos anteriores do grupo.
Palavras-chave: Câncer de pele; metástases, Quercus robur; potências homeopáticas; medicina integrativa.
Área de Concentração: Patologia Ambiental e Experimental.
Linha de Pesquisa: Ecotoxicologia e Inovações Terapêuticas.
Grupo de Pesquisa da UNIP cadastrado no CNPq: Biologia da diferenciação e transformação celulares: modulação por fatores endógenos e exógenos.
Autor(a): Elisangela Pinto
Orientador(a): Profa. Dra. Maria Anete Lallo
Data da defesa: 20/12/2024
Resumo: A hiperglicemia, uma alteração marcante no diabetes, provoca modificações na resposta imune e aumenta a suscetibilidade dos indivíduos diabéticos a infecções. Em macrófagos cultivados em alta concentração de glicose (HG) foram identificadas modificações no metabolismo, no fenótipo e na atividade fagocítica, comprometendo sua função como linha de defesa primária. Também foi relatado que camundongos com hiperglicemia induzida por estreptozotocina tiveram maior suscetibilidade à encefalitozoonose, sendo associada à diminuição de células T CD4+, B-1, B-2 e níveis diminuídos de IFN-γ. O objetivo desse estudo foi avaliar os efeitos da HG no perfil e a atividade de macrófagos obtidos de células peritoneais aderentes (APerC) desafiados com o microsporídio E. cuniculi. APerC foram cultivadas com meio RPMI suplementado com 10% de soro fetal bovino (R10) ou R10 com 30 mM de glicose (R10HG30), sendo desafiadas com esporos de E. cuniculi na concentração de 4 esporos para cada macrófago, por 1 hora, 3, 6 e 24 horas. Após esses períodos, foi mensurada a viabilidade celular, a mediana de intensidade de fluorescência (MFI) de CD40 e CD206, a carga fúngica e a produção de citocinas Th1, Th2, Th17. Macrófagos cultivados em meio R10 e desafiados com E. cuniculi por uma hora e 3 horas, apresentaram aumento do perfil M2 e declínio na razão entre M1/M2 (1:1), com aumento da produção de citocinas pró- inflamatórias TNF-α e IL-6 e atividade microbicida maior (menor carga fúngica) associada ao aumento da produção de NO. Nesse mesmo grupo, após 24 horas, houve aumento de macrófagos M1, diminuição do perfil M2 com aumento na razão entre M1/M2 (5:1), associado ao aumento da produção de citocinas pró-inflamatórias TNF-α, IL-6, IL-17 e INF-γ. Contudo, a atividade microbicida e produção de NO foram semelhantes ao grupo R10HG30. Ao desafiar com o patógeno, por uma hora e 3 horas, macrófagos cultivados com alta concentração de glicose demonstraram perfil de macrófagos semelhante ao observado no tratamento com R10, com predomínio de M2, associado a atividade microbicida reduzida (maior carga fúngica em comparação ao R10) e menor produção de NO. Após 24 horas, apesar de ser observado aumento de macrófagos M1, os macrófagos M2 continuavam altos assim como havia declínio na razão entre M1/M2 (1:1). Corroborando esse achado, foram identificadas citocinas com perfil misto TNF-α, IL-6, IL-17, INF-γ e IL-10. Conclui-se que a alta concentração de glicose direcionou os macrófagos para o perfil M2 e reduziu a produção de NO e a atividade microbicida de macrófagos M1 contra E. cuniculi.
Palavras-chave: Imunidade inata; hiperglicemia; macrófagos; Microsporidia.
Área de Concentração: Patologia Ambiental e Experimental.
Linha de Pesquisa: Patologia Integrada e Translacional.
Grupo de Pesquisa da UNIP cadastrado no CNPq: CLININFEC - Clínica e doenças infecciosas veterinárias.
Autor(a): Liv Nunes Almeida Gomes
Orientador(a): Profa. Dra. Ivana Barbosa Suffredini
Data da defesa: 20/12/2024
Resumo: O câncer de mama, em virtude de sua elevada incidência e patogenia, motiva a busca por agentes quimioterápicos mais seguros, uma vez que os tratamentos atuais produzem efeitos colaterais severos, além de resistência tumoral. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a atividade antiproliferativa de 315 extratos vegetais e analisar o potencial antiproliferativo de um total de 871 extratos vegetais, incluindo dados de 556 extratos previamente testados, todos obtidos de plantas amazônicas, em um modelo que utiliza células de adenocarcinoma mamário humano MCF-7. Os extratos foram avaliados quanto à atividade antiproliferativa em duas etapas: a primeira, feita com todos os extratos, consistiu na seleção daqueles com porcentagem de crescimento mais baixa obtida pelo teste da viabilidade celular com o uso de sulforrodamina B e pelo uso da estatística descritiva, a partir da elaboração da tabela de distribuição de frequências usando a expressão de Struge. Na segunda etapa empregou-se a porcentagem de crescimento obtida para a doxorrubicina, uma substância de referência no tratamento de tumores malignos, como valor de referência para a seleção final dos extratos mais promissores. Dos 871 extratos, foram selecionados 82 ativos (9,41%) na primeira etapa do trabalho, e destes, 22 (26,83% dos 82, ou 2,53% dos 871) com potencial significativo de atividade antiproliferativa. A metodologia proposta permitiu a seleção de 22 extratos potencialmente ativos quanto à atividade antiproliferativa e serão testados quanto ao perfil químico e submetidos a testes de avaliação da capacidade antiproliferativa utilizando-se células de tumor de mama de cadela e de gata, futuramente.
Palavras-chave: Citotoxicidade; Clusiaceae; Floresta Amazônica; Melastomatacea; plantas medicinais; tumor de mama.
Área de Concentração: Patologia Ambiental e Experimental.
Linha de Pesquisa: Ecotoxicologia e Inovações Terapêuticas.
Grupo de Pesquisa da UNIP cadastrado no CNPq: Atividades biológicas, farmacológicas e toxicológicas de produtos naturais / Terapêutica medicamentosa aplicada às Ciências da Saúde.
